Тема 8

Занятие 11

Работа 8.2

Плоскостная хроматография

Качественный и количественный анализ веществ бумажной и тонкослойной хроматографией

Приборы и реактивы: хроматографические пластины, фломастеры, хроматографическая бумага, простые карандаши, большие пробирки, линейки, корковые пробки, кнопки, стаканы на 1 л, камеры для разгонки хроматограмм, дистиллированная вода, калькулятор.

Метод распределительной хроматографии на бумаге или на пластине - одна из модификаций хроматографического мето­да определения веществ и элементов. Этот метод предназначен для концентрирования, очистки, разделения, качественного и количественного анализов смеси веществ.

Разделяемые компоненты распределены между двумя фазами:

1) неподвижный слой с большой поверхностью;

2) поток, фильтрующийся через неподвижный слой.

При хроматографии подвижность растворенного вещества относительно фронта растворителя постоянна для данного вещества. Это может быть выражено величиной Rf:

Измеряют расстояние от точки нанесения пробы до центра пятна (А) и от от старта до фронта растворителя (Б) (рис. 48).

Если фронт растворителя выходит за пределы бумаги или пластины, то подвижность данного растворенного вещества можно выразить в сравнении с подвижностью другого стандартного вещества. Тогда:

Метод хроматографии в тонком слое заключается в следующем:

1) на пластинке с сорбентом отмечают стартовую линию на расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки (рис.48);

2) микропипеткой, медицинским шприцем или пипеткой с оттянутым концом на середину стартовой линии наносят исследуемое вещество. Пробу наносят осторожно, подсушивая пятно, чтобы слой сорбента не нарушался, а диаметр пятна не превышал 10 мм;

3) справа и слева от пробы на расстоянии 1,5-2 см микропипеткой наносят стандартные растворы, содержащие идентичное вещество или его компоненты в известных количествах, например 5 и 15 мкг;

4) пластинку краем со стартовой линии опускают в камеру на 0,5 см. На дно камеры за 30 мин до хроматографирования наливают подвижный растворитель или смесь растворителей;

5) когда подвижный растворитель поднимется на 1 см от верхнего края пластинки, ее вынимают из камеры. Пластинку оставляют на несколько минут до испарения растворителя;

6) пластинку опрыскивают проявляющим раствором, который содержит реактив,определяющий и проявляющий качественную реакцию на элемент вещества;

7) при необходимости пластинку подвергают УФ-облучению;

8) в модельных опытах в качестве системы растворителей используют дистиллированную воду.

Двумерная хроматография

Работа 8.3

Рис. 48. Методы хроматографии

Качественный анализ. По величине фронта растворителя, Rf образца и Rf стандартов (свидетелей) вещество идентифицируют.

Например, величины Rf хлорорганических препаратов в системе гексан – ацетон 2:1 при обработке раствором азотнокислого серебра под источником УФ - света равны: γ-ГХЦГ - 0,63; ДДТ - 0,87; 4,4-ДДД - 0,85.

Количественное определение проводят путем сравнения размеров и интенсивности пятен пробы и стандартных  растворов. Расчет  количества вещества:

где Х - содержание вещества в пробе, мг/кг или мг/л;

А - количество вещества, найденное путем визуального сравнения размеров и интенсивности пятен пробы со стандартом, мкг;

S1 - площадь пятна стандартного раствора, мм2;

S2 - площадь пятна пробы, мм2;

А1 - содержание вещества в стандартном растворе, мкг (взять 10 мкг);

Р - масса, объем исследуемой пробы, г, мл (взять условно 5 г).

Справочный материал для количественного расчета веществ в системе дан в прил. 13.