Тема 6

Работа 6.3

Определение концентрации хлорофил­ла и каротиноидов на спектрофотометре СФ-26

Спектрофотометрический анализ - наиболее точ­ный количественный метод определения содержания пигментов листа.

Как и на фотоэлектроколориметре, концентрация пигментов на спектрофотометре определяется по оптической плотности. Спектрофотометр позволяет выполнять анализ смесей веществ с близкими максимумами поглощения, что достигается за счет использования монохроматора. Вследствие этого удается установить содержание хлорофиллов и каротиноидов в вытяжке без предварительно­го разделения. Плотность экстракта на спектрофотомет­ре измеряют при длинах волн, соответствующих мак­симумам поглощения хлорофиллов а и b в красной области спектра и при длине волны абсорбционного мак­симума каротиноидов. При этом учитывают, что поло­жение максимума поглощения несколько меняется в за­висимости от используемого растворителя. Концентрацию пигментов определяют с разными растворителями и на разных длинах волн.

Концентра­цию пигментов рассчитывают по нескольким уравнениям, учитывая длины волн и растворители:

для 100 %-го ацетона (по Хольму - Веттштейну):

Схл.а = 9,784D662 - 0,990 D644; 

Схл.b = 21,426 D644 - 4,650 D662;

Схл.а +хл.b = 5, 134 D662 + 20,436 D 644;

Скар = 4,695 D 440,5 - 0,268 Схл.а +хл.b;

для 85 %-го раствора ацетона (по Реббелену):

Схл.а = 10,3 D663 - 0,918 D644;

Схл.b = 19,7 D644 - 3,87 D663;

Схл.а +хл. b = 6,4 D663 + 18,8 D644;

Скар = 4,75D452,5 - 0,226 Схл.а +хл. b;

для 80 %-го раствора ацетона (по Вернону):

Схл.а  = 11,63 D665 - 2,39 D649;

Схл.b = 20,11D649  - 5,18 D665;

Схл.а + хл. b = 6,45 D665 + 17,72 D649;

для 96 %-го раствора этанола:

Схл.а = 13,70 D665 - 5,76 D649;

Схл.b = 25,80 D649  - 7,60 D665;

Схл.а +хл. b = 6,10 D665 + 20,04 D649 = 25,1D654;

для этилового эфира:

Схл.а = 9,93 D660 - 0,78D642,5;

Схл.b = 17,6 D642,5 - 2,81D660;

Схл.а +хл. b = 7,12 D660 + 16,8D642,5;

где: Схл.а, Схл.b, Схл.а+хл.b и Скар - соответственно концентрации хлорофиллов а, b, их суммы и каротиноидов, мг/л;

D - экспери­ментально полученные величины оптической плотности при соответствующих длинах волн.