При микроскопии неокрашенных микроорганизмов, отличающихся от окружающей
среды только по показателю преломления, изменения интенсивности света (амплитуды)
не происходит, а изменяется только фаза прошедших световых волн. Поэтому глаз
этих изменений заметить не может и наблюдаемые объекты выглядят малоконтрастными,
прозрачными. Для наблюдения таких объектов используют фазово-контрастную
микроскопию, основанную на превращении невидимых фазовых изменений,
вносимых объектом, в амплитудные, различимые глазом.
Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом световом микроскопе
и состоит из:
1) набора объективов со специальными фазовым пластинками;
2) конденсора с поворачивающимся диском. В нем установлены кольцевые диафрагмы,
соответствующие фазовым пластинкам в каждом из объективов;
3) вспомогательного микроскопа.
Фазово-контрастная микроскопия Bacillus Cereus на плотной питательной среде (в камере М. А. Пешкова) |
 |
Настройка фазового контраста основном заключается в следующем: 1) заменяют объективы и конденсор микроскопа на фазовые (обозначенные буквой Ф или ph) ; 2) устанавливают объектив малого увеличения. Отверстие в диске конденсора должно быть без кольцевой диафрагмы (обозначенной цифрой «0»); 3) настраивают свет по Келеру; 4) выбирают фазовый объектив соответствующего увеличения и фокусируют его на препарат; 5) поворачивают диск конденсора и устанавливают соответствующую объективу кольцевую диафрагму; 6) вынимают из тубуса окуляр и вставляют на его место вспомогательный микроскоп. Настраивают его так, чтобы были резко видны фазовая пластинка (в виде темного кольца) и кольцевая диафрагма (в виде светлого кольца того же диаметра). С помощью регулировочных винтов на конденсоре совмещают эти кольца. Вынимают вспомогательный микроскоп и вновь устанавливают окуляр.
Благодаря применению этого способа микроскопии контраст живых неокрашенных
микроорганизмов резко увеличивается и они выглядят темными на светлом фоне
(позитивный фазовый контраст) или светлыми на темном фоне (негативный фазовый
контраст). В РФ выпускают устройство КФ-4 для позитивного фазового контраста.
Фазово-контрастная микроскопия применяется также для изучения клеток культуры
ткани, наблюдения действия различных вирусов на клетки и т. п. В этих случаях
часто применяют биологические микроскопы с обратным расположением оптики
- так называемые инвертированные микроскопы. У таких микроскопов объективы
расположены снизу, а конденсор - сверху. За изобретение фазово-контрастной
микроскопии его автор голландский физик Цернике был удостоен Нобелевской
премии.