Экологический  мониторинг и экологическая экспертиза

Содержание

Работа 4. Фотометрическое определение количества фосфатов в растениях

В качестве хромофорного реагента используют раствор молибденовокислого аммония в присутствии хлористого олова или аскорбиновой кислоты. Результат определения ортофосфатов дает суммарную концентрацию Н3РО4, Н2РО4–, НРО42–, РО43–.

Ванадо-молибдатный метод, основан на способности фосфорной кислоты, давать в растворе 20%-й азотной кислоты с 0,25%-м раствором ванадиево-кислого аммония и 5%-м раствором молибдата аммония комплексные соединения желтого цвета (Н3РО4 × VО3 × n MoO3 × H2O).

Калибровочный график строят по содержанию P2O5. Колориметрирование проводят при длине волны 460 нм, применяя синие светофильтры.

Содержание фосфора (%) рассчитывают по формуле

,

где а – содержание фосфора в мерной колбе, найденное по графику, мг;

100 – коэффициент для выражения результатов в процентах;

V1 – объем исходного раствора, мл;

n – навеска, мг;

V2 – количество исходного раствора, взятого для окрашивания, мл.

1. Фотоколориметр или спектрофотометр;

2. Мерные колбы на 50 и 100 мл;

3. Кюветы с толщиной слоя 2-5 см;

4. Пипетки;

1. НСl концентрированная;

2. Рабочий раствор однозамещенного фосфата калия (КН2РО4), 1 мл которого содержит 0,001 мг фосфатов (РО43–);

3. Раствор молибденово-кислого аммония;

4. Хлорид олова; аскорбиновая кислота;

5. Смешанный реактив (прил. 14, прил. 15);

6. 20%-я азотная кислота;

7. 0,25%-й раствор ванадиево-кислого аммония;

8. 5%-й раствор молибдата аммония.

Определение фосфора со смешанным реактивом

Для приготовления шкалы образцовых растворов используют КН2РО4, 1,918 г которого растворяют в литровой колбе с дистиллированной водой. Раствор содержит 1 мг Р2О5 в 1 мл. Доводят 100 мл раствора до 1 л. Этот раствор содержит 0,1 мг Р2О5 в 1 мл. И еще один раз разводят раствор до 0,01 мг Р2О5 в 1 мл.

В мерные колбы вместимостью 50 мл вносят 0; 0,5; 1; 2; 5; 10; 20 мл рабочего стандартного раствора, что соответствует содержанию фосфатов 0; 0,0005; 0,001; 0,002; 0,005; 0,01; 0,02 мг.

Доводят объем до метки дистиллированной водой. Прибавляют 2 или 3 мл смешанного реактива, аскорбиновой кислоты, перемешивают. Через 10 мин фотометрируют при красном светофильтре (λ = 690-720 нм) в кюветах с толщиной оптического слоя 2-5 см или на спектрофотометре (λ = 882 нм) по отношению к 50 мл дистиллированной воды, в которую добавлено 2-3 мл смешанного реактива.

Строят калибровочный график в координатах «оптическая плотность – содержание фосфатов (мг)».

Для определения фосфора проводят озоление растений с серной кислотой и с добавлением катализаторов. После озоления растений фосфор можно определить колориметрически. К 50 мл профильтрованного раствора (или меньшему объему при содержании фосфатов более 0,4 мг/л, разбавленному до 50 мл дистиллированной водой) прибавляют 2 или 3 мл (аналогично выстроенному графику) смешанного реактива, аскорбиновой кислоты, перемешивают и через 10 мин фотометрируют при красном светофильтре (λ = 690-720 нм) в кюветах с толщиной оптического слоя 2-5 см, в зависимости от интенсивности окраски, или на спектрофотометре (λ = 882 нм) по отношению к 50 мл дистиллированной воды, в которую добавлено 2-3 мл смешанного реактива.

Концентрацию ортофосфатов (мг/л) вычисляют по формуле

,

где А – содержание ортофосфатов, найденное по калибровочному графику, мг;

V – объем пробы, взятой для анализа, мл.