|
Организация самостоятельной работы Приложение 6 Высаливание и диализ белков Изоэлектрическая точка белка (–СОО–=NH4+)–рН, это такая точка, при которой белок электрофоретически неподвижен. Такое состояние белка достигается путем подбора буферной системы. В данном значении рН взаимодействуют противоположно заряженные группы соседних молекул, что ведет к их последующей агрегации и быстрому осаждению. Агрегацию, а следовательно, и осаждение белковых молекул вызывают добавлением к раствору белка солей, например сульфата аммония. Молекулы белка и неорганические ионы при гидратации конкурируют за молекулы воды, и по достижении определенной концентрации соли взаимодействия «белок – белок» начинают преобладать над взаимодействиями «белок – вода». Это приводит к агрегации, а затем к осаждению белка. Это так называемый метод высаливания белка, т.е. выделения белка для последующей с ним работы. Затем, проведя диализ, т.е. вымыв все соли, белок можно использовать для исследования его физико-химических свойств, физико-химических характеристик и выявления роли именно этого белка в какой-то определенной реакции, например детоксикации ксенобиотика, или в стимуляции процесса. |