Биологические препараты и их применение
✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗✗
который развивается после введения вакцины, называется поствакцинальным иммунитетом. Вакцинация не всегда бывает эффективной. Вакцины теряют свои качества при неправильном хранении. Но даже если условия хранения соблюдались, всегда существует вероятность, что иммунитет не простимулируется. Поэтому необходимо соблюдать правила хранения и транспортировки препаратов и проверять качество вакцин перед использованием.
Способность вакцин вызывать состояние невосприимчивости проверяют биологическим способом (заражая патогенными микробами предварительно иммунизированных лабораторных животных).
Основным показателем является индекс защиты – частное от деления числа заболевших или погибших неиммунизированных животных на такой же показатель иммунизированных животных.
По аналогии с лекарственными препаратами, одним из условий вакцинации является доставка вакцинного материала до иммунокомпетентных клеток, так как он может подвергаться различным ферментативным воздействиям. Для этого в вакцины вносят различные стабилизирующие агенты, но более предпочтительно использование различных носителей, например липосом или моноклональных антител. Применение моноклональных антител ограничивают их свойство перекрестно реагировать с различными тканевыми антигенами макроорганизма. Большие перспективы имеют липосомы – микроскопические пузырьки, стенки которых образованы двойственным слоем фосфолипидов. Благодаря этому сходству с биологическими мембранами липосомы не распознаются как чужеродные, не прояваляют токсических свойств, легко адсорбируются на клетках, а также длительно сохраняют свое содержимое в крови и различных тканевых жидкостях. При поглощении липосом макрофагами их стенки постепенно растворяются, выделяя заключенные в них антигены в цитоплазму фагоцитов, вызывая более интенсивное развитие иммунных реакций, в сотни и тысячи раз превосходящее эффект от парентерального введения антигенов. При этом антигены, фиксированные на мембранах липосом проявляют свойства адъювантов, усиливающих развитие иммунного ответа.
К сывороточным иммунным препаратам относят иммунные сыворотки и иммуноглобулины (Ig). Эти препараты обеспечивают пассивную невосприимчивость к возбудителям инфекционных болезней. Действующее начало таких препаратов – специфические антитела. Другими словами, в организм животного вводят готовые антитела. Поэтому их можно использовать для профилактики и лечения инфекций. Содержание антител в сывороточных иммунных препаратах (активность) выражают в титрах антител. По механизму действия антител сывороточных препаратов проявляют агглютинирующий, преципитирующий, комплементсвязывающий, нейтрализующий и другие эффекты. Обычно сывороточные препараты вводят парентерально, при этом состояние невосприимчивости развивается быстро, но длится недолго.
Иммунные сыворотки получают из крови иммунизированных животных. Для получения высоких титров антител лошадей и кроликов иммунизируют дробным введением соответствующих антигенов в больших дозах. Иммунная сыворотка или антисыворотка (antiserum, множ. antisera) – сыворотка, содержащая в своем составе антитела против определенных антигенов; может вводиться больному животному в лечебных целях или в качестве временной защиты (для создания пассивного иммунитета) от различных заболеваний. Для приготовления иммунной сыворотки в больших количествах используется биологический материал, взятый у лошадей. В лабораторных условиях иммунная сыворотка применяется для идентификации неизвестных ранее болезнетворных микроорганизмов.
Применяемые с лечебной целью специфические антитела выпускаются промышленностью в виде иммунных сывороток или активных в иммунном отношении фракций - иммуноглобулинов.
В ветеринарии применяют следующие
:
● поливалентная антитоксическая сыворотка против паратифа телят, ягнят, овец и птиц;
● поливалентная антитоксическая сыворотка против колибактериоза телят, поросят, ягнят;
● гипериммунная сыворотка против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов, овец и свиней;
● сыворотка против рожи свиней;
● антитоксическая сыворотка против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец;
● сыворотка против диплококковой септицемии телят, ягнят, поросят;
● антитоксическая противостолбнячная сыворотка.
Эта сыворотка крови переболевших животных, содержащая специфические антитела, применяется с лечебной и профилактической целями.
Сыворотку реконвалесцентов рекомендуется получать и применять животным в одном и том же хозяйстве. Кровь от животных-доноров берут непосредственно в хозяйстве или во время убоя их на мясокомбинате.
Получают путем гипериммунизации животных соответствующим антигеном (возбудителем). В большинстве случаев продуцентами сывороток являются лабораторные животные (кролики, морские свинки), петухи и реже лошади. Готовые сыворотки проверяют на стерильность, активность и специфичность. Все диагностические сыворотки содержат специфические антитела к определенному антигену.
Диагностические сыворотки применяют в серологических реакциях в следующих целях:
● для определения возбудителя болезни в патологическом материале (сибирская язва и др.);
● при определении вида (серогруппы, серовара) возбудителей инфекции, выделенных в чистой культуре (сальмонеллез, бруцеллез, листериоз и др.);
● в качестве заведомо положительного контроля при постановке любой серологической реакции.
В качестве продуцентов иммуносывороток используют лошадей, мулов, ослов, волов и реже другие виды животных. Гипериммунизацию осуществляют нарастающими дозами антигенов по утвержденным производственным схемам, отличающимся продолжительностью иммунизации, интервалами между циклами иммунизации, дозами для каждого цикла введения антигена и реакцией продуцента на последний.
когда в сыворотке крови продуцентов находится максимальное количество специфических антител, у животных берут кровь. Чаще это делают на 10-14 сутки после введения продуценту последней дозы антигена.
Из крови выделяют сыворотку общепринятыми методами и стерилизуют ее через бактериальные фильтры или методом тиндализации. В качестве консервантов используют 0,25-0,5% растворы фенола, 0,01-0,03% растворы тиомерсала (мертиолята) или другие Контроль на стерильность сыворотки проводят по общепринятой методике высевами из препарата на питательные среды (МПА, МПБ с глюкозой, МППБ и на агар Сабуро).
Безвредность каждой серии сывороточных препаратов проверяют на лабораторных животных, которым подкожно вводят 10 мл сыворотки. Они должны оставаться здоровыми, без выраженных проявлений местной и общей реакции.
Специфическую активность сывороточных препаратов определяют с помощью реакции биологической нейтрализации: чем меньше доза сыворотки, способная нейтрализовать действие определенной дозы инфекционного агента или токсина, тем выше ее активность.
Различают три группы иммунопрофилактических сывороток:
● антитоксические;
● антибактериальные;
● противовирусные.
Для того, чтобы получить любую из перечисленных сывороток в высоких титрах антител, необходимо провести на животных – продуцентах цикл гипериммунизации. У различных животных содержание иммуноглобулинов в сыворотке различное. Лучше всего для этих целей подходят лошади, на втором месте крупнорогатый скот (волы), далее - свиньи, после собаки, кошки. Животные должны быть хорошей упитанности, не старше 8-летнего возраста, здоровые (проверенные на острые и хронические инфекции во время 45-дневного карантина). Курс гипериммунизации на биофабриках в среднем включает 20-21 инъекцию антигена (вакцины или анатоксина) с интервалом 3-5 суток между введениями. Антиген вводят подкожно в дозах 1-1,5мл/кг массы тела животного. Периодически проверяют титр антител у гипериммунизируемых животных. Через 7-8 дней после последней инъекции делают пробное взятие крови. В зависимости от вида животного максимальное кровевзятие может быть от 1 до 2 л на 100 кг массы. После взятия крови антиген через 3 дня вводят в половинной дозе, далее через такой же интервал в обычной (последняя до кровевзятия, которая хорошо переносится животным). Через 7-8 дней вновь повторяют кровевзятие и т.д. Кровь от продуцентов берут в 15-20-литровые градуированные бутыли с 10%-м раствором лимонно-кислого натрия (или 10%-м трилоном В). Содержимое осторожно перемешивают. Цитратную кровь сепарируют для отделения форменных элементов, т.е. получается плазма крови. После этого плазму дефибринируют в дефибринаторе в течение 25-30 минут, фибрин оседает в виде нитей на специальных лопастях и получается сыворотка крови. Сыворотку консервируют фенолом (0,25-0,5%-м); крезолом (0,1-0,3%-м); тиомерсалом (0,01-0,03%-м). Сывортку при 5…8°С отстаивают в течение 2 месяцев (для выпадения в осадок неустойчивых фракций белка), фильтруют через многорамные фильтры Сальникова (пластины СФ), фасуют, этикетируют. Срок годности сыворотки 2-4 года.
⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥⬥